dna pull-8846威尼斯

dna pull down技术是体外研究dna与蛋白质互作的有力工具。该技术针对目标区域设计特异性dna探针并经过脱硫生物素标记，脱硫生物素探针可以和偶联在磁珠上的链霉亲和素亲和结合(wang,yu et al.2004)。然后，细胞提取物与磁珠-dna探针孵育，作用蛋白质分子可以和dna探针特异性结合；经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除；最后，经洗脱液洗脱，得到目的dna探针-蛋白质复合物，再经过western  blot或质谱(ms) 鉴定蛋白质类型。其原理图如1.1:

q:通过pull-down 后银染验证发现，没有想要的目的条带?

1)有可能是样品被蛋白酶降解，对应的策略是需要添加蛋白酶抑制剂，所有操作保持 4℃以下冰上操作并防止冻融；

2)有可能是加入生物素标记dna 量不足，可以增加生物素标记dna 量；

3)裂解液盐碱度太高，需用低盐碱度的裂解液；

4)加入细胞裂解液不够，可以增加细胞裂解量。

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