实验原理
rip技术(rna binding protein immunoprecipitation,rna结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内rna与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具。该技术主要是运⽤目标蛋⽩的特异性抗体把相应的rna-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化对结合在复合物上的rna进行q-pcr验证或者高通量测序分析。
实验流程
试剂盒组分
常见问题
q1:如何判断rip实验成功?
rip后wb检测ip组和input组检测到目的蛋白信号即判断rip实验成功。
q2:ip和igg样本ct值没有差异
多方面原因造成:
1.抗体没有富集到rna,可更换抗体尝试;
2.igg背景过高,可增加洗涤次数或减少免疫沉淀步骤rna投入量。
q3:溶解曲线异常
出现非特异扩增或有引物二聚体等情况,需重新设计引物。
q4:拉下样本rna浓度过低
1.样本投入量过少,考虑增加样本初始投入量。
2.裂解不完全,组织样本未研磨充分,或者用强裂解液进行裂解。
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