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【直播预告】学一下，从此酵母双杂交实验难逢敌手！
文章来源：genecreate
作者：genecreate
发布时间：2020-10-26 08:57
分子生物学研究，尤其是人类基因组计划的迅速发展，为适应对众多基因或蛋白进行功能研究的发展趋势，已涌现出很多种新技术，酵母双杂交就是其中的一种。那么我们就来简单了解下酵母双杂交系统吧。
酵母双杂交系统是一种鉴定和检测蛋白质相互作用的研究方法，因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点，现已被应用于多个研究领域。
核蛋白酵母双杂交：
核蛋白酵母双杂交技术最初由fields等人在研究酵母转录因子gal4性质时建立，后续经过不断改进已发展成为一种成熟的蛋白-蛋白互作研究工具，具有简便、灵敏、可反映蛋白在活细胞内互作真实情况的特点，被广泛应用于互作蛋白的筛选、蛋白相互作用的鉴定/验证、蛋白互作机理的探究、蛋白连锁图谱绘制等工作。
膜蛋白酵母双杂交：
dualmembrane技术在传统的酵母双杂交系统的基础上，巧妙地利用分离的泛素系统（split-ubiquitin）进行蛋白质相互作用的筛选；泛素作为降解信号分子，人为分成两部分：n端（nub），c端（cub），互补重构的完整泛素分子可被泛素专一性蛋白酶（ubps）识别，从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。
dualmembrane技术在传统的酵母双杂交系统的基础上，巧妙地利用分离的泛素系统（split-ubiquitin）进行蛋白质相互作用的筛选；泛素作为降解信号分子，人为分成两部分：n端（nub），c端（cub），互补重构的完整泛素分子可被泛素专一性蛋白酶（ubps）识别，从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。
酵母双杂交技术的应用
植物：自交不亲和机理研究……
病毒：朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选……
信号通路：转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选……
癌症医学：癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选……
寄生虫医学：毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选……
基础原理研究：肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育……
酵母杂交优势
（1）真实环境
它是一种真核细胞内的反应，相对于众多的体外实验和细菌来说，更加贴近于真实。
（2）高度灵敏
（2）高度灵敏
酵母双杂交系统可以检测到十分微弱和短暂的蛋白相互作用。
（3）海量筛选
从cdna文库中筛选与目的蛋白相互作用的新蛋白，在蛋白功能未知或已知的条件下，采用不同来源的cdna文库作为prey 筛选，可以发现新的基因，提供新的线索。
a、核蛋白酵母双杂交
b、split-ubiquitin膜蛋白酵母双杂交
c、cdna质粒文库构建服务
（4）利用酵母双杂交建立基因组蛋白连锁图
众多的蛋白质之间在许多重要的生命活动中都是彼此协调和控制的,基因组中的编码蛋白质的基因之间存在着功能上的联系。
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