技术专题
客户文献解读：pdcd5调控细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡
文章来源：genecreate
作者：genecreate
发布时间：2018-04-12 10:16
题目：pdcd5 regulates cell proliferation, cell cycle progression and apoptosis
期刊：oncology letters
影响因子：1.6
研究背景
pdcd5（programmed cell death 5）是程序性细胞死亡蛋白家族成员，同肿瘤细胞生长及凋亡密切相关。为了研究pdcd5的分子及细胞功能，本文通过慢病毒载体构建了稳定过表达pdcd5的人表皮癌细胞a431细胞株，检测了该细胞株的细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡，并进一步验证了pdcd5在肿瘤生长过程中是否通过p53行使相关功能。本研究说明了pdcd5在肿瘤发生过程中的分子功能，pdcd5作为肿瘤抑制因子,在肿瘤治疗中可能成为潜在靶分子。
研究内容及结果
1. 慢病毒包装及过表达稳转株构建
本文所使用的pdcd5过表达慢病毒及稳定过表达pdcd5的a431细胞株订购自武汉金开瑞生物工程有限公司（genecreate biological engineering co.,ltd）。通过wb及荧光定量pcr实验证明pdcd5在a431细胞株中显著过表达（fig.1 a.b.c）。
图1 pdcd5过表达水平检测
2. mtt细胞增殖实验
以空载体感染细胞为对照组、以pdcd5过表达a431细胞为实验组进行mtt实验，分别在12h、24h、48h、72h监测数据，绘制生长曲线，可见在72-96h时pdcd5过表达组的增殖显著受到抑制（fig.2）。
图2 a431细胞增殖
3. 流式细胞术检测细胞周期及凋亡
为了进一步研究pdcd5对于癌细胞增殖抑制的机制，利用pi染色后进行流式细胞术分析，结果显示pdcd5过表达的a431细胞出现g2/m周期阻滞（fig.3 a.b）。
图3 a431细胞周期
为了考察pdcd5对于肿瘤细胞凋亡的影响，使用annexin v/pi染色及流式细胞术检测过表达pdcd5的a431细胞凋亡，显示pdcd5过表达组凋亡比例显著升高（fig.4 a.b）。
图4 a431细胞凋亡
4. wb及荧光定量pcr检测pdcd5、p53及细胞凋亡相关通路蛋白表达水平
为了进一步研究pdcd5对于肿瘤细胞增殖抑制、周期阻滞的内在机制，通过wb和荧光素定量pcr检测p53、bax、bcl-2、casp3在蛋白和mrna水平的表达，发现p53、bax和casp3表达升高，bcl-2表达降低（fig.5 a.b.c）。
图5 pdcd5过表达细胞中p53、bax、bcl-2、casp3表达水平
文章小结
本文利用慢病毒构建的pdcd5稳定过表达a431细胞株为实验模型，发现pdcd5过表达细胞体增殖受到抑制、细胞周期于g2/m期阻滞、细胞凋亡率增高。进一步研究证明pdcd5过表达细胞中p53表达水平升高，凋亡通路相关基因bax和casp3呈现过表达、bcl-2基因表达降低。pdcd5可能通过经典凋亡信号通路机制影响肿瘤的生长。
解析文献
penghui li et al. pdcd5 regulates cell proliferation, cell cycle progression and apoptosis. oncology letters,2017,15: 1177-1183
参考文献
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