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病毒包装——腺病毒或者慢病毒
文章来源:未知 作者:genecreate 发布时间:2017-04-13 10:29
  随着分子生物学的迅速发展,在实验室构建各种载体、克隆及分析目标基因,使疾病深入至分子水平研究成为可能,基因诊断及基因治疗技术也随之诞生。
目前基因治疗研究的热门方法是将外源基因dna或rna片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。从而,选择合适高效的基因导入介质系统尤为关键,而病毒载体也随之成为了当前基因治疗载体研究的热点,其优势在于:
  1、病毒包装技术经历了多年的研究,已趋于成熟,可用于产业化大量生产;
  2、病毒基因组的结构简单、分子背景比较清楚,稳定易于改造、易于制备;
  3、病毒的宿主范围广,且具有高效的靶向特异性;
  4、在目的基因表达方面相对于脂质体介导的效果更明显、长时、稳定;
  5、通过载体改造的方式形成了复制缺陷型结构,安全性高;
  6、可提高rna干扰和基因过表达效率,增加实验成功率。
  用于病毒包装的载体主要有腺病毒载体和慢病毒载体。
  慢病毒包装腺病毒包装技术服务,慢/腺病毒包装稳定性好、滴度高、纯度高,价格优惠、周期短。
  那么,慢病毒和腺病毒应该如何选择呢?
  慢病毒可以插入细胞基因组,稳定表达,持续时间长。 包装周期较短(一般要两个月),感染效率相对于腺病毒要低很多。不能扩增,一次包装的病毒用完后如果再需要只能重新包装,成本高。一次包装所得到的的病毒滴度也相对较低,不大适合直接用于动物实验。
  腺病毒感染效率高,很多细胞都能达到近 99%。纯化后的腺病毒可以直接进行动物活体注射。可以在体外扩增,每次使用完后,可以自己用包装细胞进行扩增,节约成本。一次包装所得到的滴度较高。不整合到基因组,无法稳定表达。包装过程相对繁琐,腺病毒包装周期比慢病毒较长(一般要两个半月到三个月)。
  总之,慢病毒包装简单、周期短、可稳定表达;腺病毒滴度高、感染及表达蛋白的能力强。在实验中,需根据自己的实验目的进行实际选择。
腺病毒及慢病毒特点综合整理如下: 
特点 慢病毒表达系统 腺病毒表达系统
病毒类型 rna逆转病毒 双链dna病毒
能否自主复制
能否自行扩增 需要特殊包装系统和包装环境
是否整合 是,病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 否,病毒基因组瞬时表达外源基因
克隆容量 可插入不超过8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低 可插入高达8kb的外源片段,滴度随插入片段长度增加而降低
感染细胞类型 感染绝大多数细胞,包括分裂期、非分裂期细胞。 感染绝大多数细胞,包括分裂期、非分裂期细胞。
表达时间 慢(2-4 天) 快(1-2 天)
表达丰度 中等水平 高水平
滴度 可达10e9-10e10tu/ml 可达10e12pfu/ml
免疫原性 低免疫原性 高免疫原性
基因过表达 包装容量有限,过表达的基因过大时,病毒滴度受到影响 包装容量较大,可以满足较大基因的包装,是过表达基因的首选工具
microrna过表达 适合,是过表达microrna实验的首选工具 适合
rnai 适合,是rnai实验的首选工具 病毒进入细胞往往引起细胞内干扰素反应,一般情况下不适合做rnai实验
下调microrna 有报道但不成熟 有报道但不成熟
腺病毒包装详细信息:http://www.genecreate.cn/adenovirus_package/   

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