技术专题
【周二直播预告】染色质免疫沉淀技术（chip），“研”无不尽！
文章来源：genecreate
作者：genecreate
发布时间：2020-11-02 09:32
人类已经无法阻止dna与蛋白不停地秀恩爱了，它们缠绵悱恻的互作情感给大家的课题研究带来了不少苦头。目前，不断发展的研究dna和蛋白质相互作用的方法和技术，已经成为研究dna复制、重组、修复和转录的核心。今天小金要跟大家分享的是耳熟能详的染色质免疫共沉淀方法，这也是我们下周二直播的主题!
金开瑞第二季实验直播安排表
染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, chip）是将样品中同抗体靶蛋白相互作用的dna随免疫复合物沉淀，是研究体内蛋白质与dna相互作用的有力工具，利用该技术不仅可以检测体内反式因子与dna的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰以及转录因子与基因表达的关系。
chip实验流程
应用领域
- 判断dna链的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰
- 检测rna polymerase ii及其它反式因子在基因组上结合位点的精确定位
- 研究组蛋白共价修饰与基因表达的关系
- 转录因子研究
chip抗体问题
- 需要选用经过chip验证的商品化抗体，这类抗体常会标明chip grade。无chip验证有ip验证的抗体可以尝试使用。
- 蛋白难以找到chip级抗体：较常用的方式可以将目的蛋白同某种标签融合表达，比如ha、gfp、myc等标签，使用这些标签抗体的chip级抗体，这种途径也常见于发表文献中。无chip验证有ip验证的抗体可以尝试使用。
- 一个样本需要准备的抗体量至少应＞10μg或10μl，建议尽量提供或代购过量的抗体，项目完成后我们可以寄回给客户。
- 单抗的风险在于其识别表位可能恰好被掩蔽（dna或交联环节），而多抗可识别多个表位可基本避免该风险。因此单多抗各有优缺点，应重点关注该抗体是否经过chip验证。
chip样品问题
- 样本选择：特定的时期，特定的组织。
- 每一份独立样品的最低需要量，动物细胞＞2x107，动物组织＞1g，植物组织＞4g。
- 动植物组织样品需在离体后尽快液氮速冻、-80℃保存至寄送。植物组织尽量选取幼嫩新鲜部分。样品寄送须使用足量干冰。
- 对于特殊处理或珍贵样品，可以把交联试剂寄给客户，客户在我们指导下完成交联后，再干冰寄送，对于成功率很有好处、尤其是转录因子。
因为chip实验涉及的步骤多，结果的重复性较低，所以对chip实验过程的每一步都应设计相应的对照，而且对结果的分析也需要有一定的经验。如果chip实验方面有什么问题，欢迎周二晚八点来直播间与我们交流哦！
温馨提示：微信扫码预约直播，开播前五分钟会收到开播提醒。(抖音id：小金博士)
