客户文献分享 | if=8.022，蓝莓类外泌体囊泡及其富集的mirna跨界调控人源基因功能分析 -8846威尼斯

影响因子：8.022/q1

合作项目：外泌体的提取、鉴定、测序以及个性化分析

    细胞的微环境中主要包含着三种细胞外囊泡（evs），分别是：外泌体（exosome，exo）、微泡（microvesicles，mv）和凋亡小体（apoptotic bodies，ab），其中外泌体是几乎所有类型细胞分泌的内源性纳米颗粒的重要组成部分。它是一种小的杯状或泡状的囊泡结构，直径约为30~150 nm，密度为1.13-1.19 g/ml，它能调节不同类型细胞之间的相互作用，并包含各种成分（包括dna、rna、蛋白质、脂质等），此外，它可以提供一种循环的、可追踪的特异性标记，在细胞生理学、病理学和临床诊断应用中展现出巨大的潜力。近年来，植物类外泌体受到越来越多的关注，尤其是它对人类基因的跨界调控作用，以及其本身的天然载体作用。

    我公司前期助力华中农业大学袁方教授研究团队，采用尺寸排阻色谱法和超速离心法成功从蓝莓中提取出类外泌体囊泡（blueberry exosome-like nanoparticles, b-eln），并对其内部富集的mirna进行测序和基因组分析。

图1  基于尺寸排阻色谱法提取的b-eln

   在本研究中超速离心法和尺寸排阻色谱法都成功提取到了蓝莓类外泌体囊泡。经过动态光散射（dls）检测，测得提取出的类外泌体囊泡平均粒径为119 nm，在透射电镜（tem）视野下，我们可以明显看到“茶托样”或“杯状”的囊泡结构。

图2  通过尺寸排阻色谱法提取的不同组分b-eln粒径分布

图3  超速离心提取的b-eln粒径、电镜检测以及rna测序和富集分析

   目前已有不少研究表明，植物外泌体中的mirnas可通过饮食途径到达人类的血液系统，经过循环途径，到达全身各处器官，通过影响相关通路和调控转录来发挥调节作用。但由于植物来源的多样性，这些mirna的功能在很大程度上仍是未知的。本课题在提取的b-eln和蓝莓组织样本中，共鉴定出318个mirna，其中差异表达的mirnas有89个，包括36个上调和53个下调的mirna。通过qrt-pcr验证，发现qrt-pcr的表达结果与rna-seq的表达结果高度相关，表明rna-seq数据可靠，适合进一步分析。

图3  kegg富集通路分析

    随后，团队通过对36个上调mirna的通路富集分析预测出了其与人类靶基因密切相关的57个go生物过程和336个kegg通路，提示b-elns中富集的mirna可跨界调控人源基因。分子功能注释中最富集的go terms是结合活性和催化活性，kegg注释结果显示相关性最高的通路是传染性疾病和癌症，并且16个kegg通路与人类的消化系统密切相关。上述研究结果为我们进一步探索植物源基因的跨界调控功能提供了理论依据。

    我公司聚焦于提供外泌体的个性化定制服务，致力于为您的科研之旅保驾护航。