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电泳迁移率实验
文章来源:genecreate 作者:genecreate 发布时间:2022-10-31 10:43
项目介绍 project introduction

 *凝胶迁移电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,emsa)是一种研究蛋白质和dna序列相互结合的技术,可用于定性或定量分析。



原理简介 principle introduction

 *蛋白质可以与生物素标记的核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。

凝胶迁移

电泳迁移率

 目的蛋白与生物素标记的dna探针结合,电泳时蛋白-dna复合物比无蛋白结合的dna探针在凝胶中泳动的速度慢,显影出现相对滞后条带。



emsa类型 emsa type

 01 验证型emsa

用于验证探针是否含有可与蛋白质结合的位点。将结合位点突变,以突变探针为对照,野生型探针出现迁移条带,而突变探针未出现迁移条带,则说明该探针含有可与蛋白质结合的位点。

 02 竞争型emsa

探针序列不变,不含修饰基团的探针称为冷探针。冷探针与标记探针竞争性地与蛋白结合,冷探针不显影出迁移条带。以冷探针为对照,标记探针出现迁移条带,而冷探针迁移条带减弱或消失,则排除了假阳性干扰,增加实验结果准确性。

 03 超迁移emsa

使用目标蛋白的特异性抗体,蛋白-探针复合物被抗体识别并结合,该三聚复合物在凝胶电泳中,迁移速率再次增大,出现在蛋白-探针复合物的上方的超迁移条带,验证了探针与目的蛋白的特异性结合。





注意要点 general condensed summary

▶亦可用于研究rna结合蛋白和其相关rna序列的相互作用。
▶ 如需要做超迁移,需提供ip级别的抗体。
▶ emsa与酵母单杂交,可共同验证同一个问题。

 

项目流程 project process  

dna序列



报价与周期 quotation and work cycle

◎提取总蛋白

核酸

◎蛋白表达与纯化





文献分享 research sharing

01
nuclear factor kappa b/p65 plays a positive role in peroxisome proliferator-activatedreceptor δ expression in orange-spotted grouper , epinephelus coioides.
期刊: fish and shellfish immunology if:3.298 发表时间:2020



binding reactions of ecp65 and ecpparδ promoter. biotin-labelled emsa probes are incubated with lysates of hek293t cells including ecp65 protein. wt, wild-type probe; mt, mutated probe. positive control indicates ecpparδ protein, negative control indicates ecpparδ-wt.
文章中emsa实验由本公司提供相关服务。

02

functional analysis of irf1 reveals its role in the activation of the type i ifn pathway in golden pompano, trachinotus ovatus (linnaeus 1758).
期刊:int j mol sci. if:4.183 发表时间:2020



binding reactions of irf1 and toifna3 prompter. biotin-labeled emsa probes were incubated with lysates of hek293t cells containing toirf1 protein.wt,wild-type probe;mt:mutated probe.1,negative control;2,positive control;3,plus toifna3-p2-wt5;4,toifna3-p2-wt5 plus toirf1-flag;5,plus toifna3-p2-mt5;6,toifna3-p2-mt5 plustoirf1-flag.
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