酵母单杂交原理及实验步骤-8846威尼斯

    酵母单杂交（yeast one-hybrid，y1h）是一种用于筛选dna与蛋白质相互作用的技术。其原理是基于酵母细胞中的转录因子gal4和对应的启动子gal1/10，将目标dna片段插入到gal1/10启动子上游，在酵母细胞中表达成融合蛋白，与bd-融合蛋白结合形成一个复合物，从而实现对dna靶点的筛选。

酵母单杂实验视频

    其具体实验步骤如下：

    构建两个重组质粒，其中一个含有待测核酸序列、gal1/10启动子和选择性标记；另一个质粒含有bd-gal4融合蛋白。

    在酵母细胞中转化这两个质粒，使其在同一细胞中表达。

    在选择性培养基上筛选转化后的酵母细胞，筛选出可生长的克隆，这些克隆代表了bd-gal4蛋白和目标dna片段的相互作用。

    对筛选出来的克隆进行进一步验证，如确认目标dna片段是否真正结合到bd-gal4蛋白上，以及进一步鉴定筛选出来的dna靶点。

    通过这些步骤，我们可以实现酵母单杂交技术，从而筛选出与特定蛋白相互作用的dna序列，进一步深入了解生物分子之间的调控机制。